《300：一个帝国的崛起》根据弗兰克·米勒（Frank Miller）漫画改编，故事从“温泉关战役”的十年之前开始。当时波斯国王大流士（Darius）率领的军队在马拉松战役（Battle of Marathon）中大败而归，他告诫儿子“薛西斯”（《三百斯巴达勇士》中的反派），不要进攻希腊，因为那会遭到天谴。但薛西斯没有理会，即位后集结了一支庞大的军队攻打希腊，誓要踏平此地为报父仇。
加拿大绿宝石国家公园生活着两群完全不相来往的两群狼，其中凯特（海顿·潘妮蒂尔 Hayden Panettiere 配音）是西部狼群首领的女儿，对她来说原则、职责和责任重于一切；亨弗雷（贾斯汀·朗 Justin Long 配音）则来自另一个狼群，成天嘻嘻哈哈，无忧无虑，是个享受派。凯特即将嫁给东部狼群首领的儿子加斯（克里斯·卡马克 Chris Carmack 配音），并不是为了爱情，而是为了阻止两只狼群之间即将爆发的一场可怕战争。世事难料，就在婚礼当天，凯特和亨弗雷被森林管理员抓走送去了爱达荷州的“锯齿”国
